PROTOCOLO EXPERIMENTAL
LUNES 19 DE ENERO DE 2015
PRÁCTICA: EXTRACCIÓN DE ADN
RESUMEN DE PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES NECESARIOS
Preparación de la
solución de extracción.
1.
Ponga 3 g. de sal y 80 ml de agua destilada en
un vaso de precipitados de 150 ml
2.
Mezcle hasta que la sal se disuelva
completamente
3.
Añada a la mezcla 10 ml de detergente líquido
4.
Agregue agua destilada hasta completar 100 ml.
5.
Mezcle ligeramente para evitar la producción de
burbujas
MATERIAL: Balanza granataria, Cloruro de sodio, vaso de pp.
de 250 ml, agitador de vidrio, probeta de 50 ml, agua destilada
Preparación de la
pulpa para extracción.
1.
Licúe 100 g de cebolla, pero no demasiad0. Aproximadamente 15 segs a velocidad media.
MATERIAL: Licuadora, vaso de precipitados de 250 ml.
Extracción.
1.
En un vaso de precipitados coloque la pulpa de
la cebolla y añada la solución de extracción. Mezcle perfectamente para
distribuir la solución de extracción en toda la pulpa.
2.
Coloque el vaso de precipitados en baño maría
con agua a una temperatura de 60°C.
3.
Mezcle continuamente la solución para que esta
sea homogénea y la temperatura uniforme.
4.
Después de 15 minutos coloque la solución en un
baño maría de agua fría.
5.
Mezcle la solución constantemente para
uniformizar la temperatura
6.
El tiempo de enfriamiento será de 15 minutos.
MATERIAL: Cristalizador, parrilla, termómetro.
Filtración.
1.
Coloque una coladera encima de un vaso de
precipitados de 600 ml.
2.
Acomode dos gasas dentro de la coladera.
3.
Filtre el contenido de la solución de
extracción.
4.
Repita la operación, utilizando ahora una hoja
de papel filtro para café.
MATERIAL: Coladera, vaso de precipitados de 600 ml, gasas,
papel filtro para café.
Proteólisis.
1.
Agregue media cucharadita de ablandador de
carnes al filtrado.
2.
Deje actuar el ablandador por espacio de 3
minutos.
3.
Vuelva a filtrar repitiendo los pasos del
procedimiento de “Filtración”.
MATERIAL: Coladera, vaso de precipitados de 600 ml, gasas,
papel filtro para café, ablandador de carnes.
Precipitación del
ADN.
1.
En un tubo de ensayo coloque 10 ml de la
solución filtrada.
2.
Agregue la misma cantidad de alcohol etílico
frío, dejando que resbale por las paredes del tubo, sin dejar que se mezcle con
la solución filtrada.
3.
Deje reposar en la gradilla por espacio de 5
minutos. En la interfase del líquido se formará una sustancia lechosa que
contiene el ADN de la cebolla.
MATERIAL: 1 Gradilla, dos tubos de ensayo, alcohol etílico
frío, una probeta de 50 ml.
Observación al
microscopio.
1.
Con ayuda del agitador o de un asa
bacteriológica obtenga un poco de muestra del sobrenadante del tubo y colóquelo
en un portaobjetos.
2.
Tiña la muestra con azul de metileno o con
hematoxilina de Harris.
3.
Deje actuar el colorante por dos minutos, retire
el exceso.
4.
Coloque un portaobjetos y observe bajo el
microscopio.
MATERIAL: Agitador de vidrio o asa bacteriológica,
portaobjetos, cubreobjetos, azul de metileno o hematoxilina de Harris,
microscopio compuesto.
