Colegio del Valle de México. Práctica Extracción de ADN

PROTOCOLO EXPERIMENTAL
LUNES 19 DE ENERO DE 2015
PRÁCTICA: EXTRACCIÓN DE ADN

RESUMEN DE PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES NECESARIOS

Preparación de la solución de extracción.

   1.       Ponga 3 g. de sal y 80 ml de agua destilada en un vaso de precipitados de 150 ml

   2.       Mezcle hasta que la sal se disuelva completamente

   3.       Añada a la mezcla 10 ml de detergente líquido

   4.       Agregue agua destilada hasta completar 100 ml.

   5.       Mezcle ligeramente para evitar la producción de burbujas

MATERIAL: Balanza granataria, Cloruro de sodio, vaso de pp. de 250 ml, agitador de vidrio, probeta de 50 ml, agua destilada

Preparación de la pulpa para extracción.

   1.       Licúe 100 g de cebolla, pero no demasiad0. Aproximadamente 15 segs a velocidad media.

MATERIAL: Licuadora, vaso de precipitados de 250 ml.

Extracción.

   1.       En un vaso de precipitados coloque la pulpa de la cebolla y añada la solución de extracción. Mezcle perfectamente para distribuir la solución de extracción en toda la pulpa.

   2.       Coloque el vaso de precipitados en baño maría con agua a una temperatura de 60°C.

   3.       Mezcle continuamente la solución para que esta sea homogénea y la temperatura uniforme.

   4.       Después de 15 minutos coloque la solución en un baño maría de agua fría.

   5.       Mezcle la solución constantemente para uniformizar la temperatura

   6.       El tiempo de enfriamiento será de 15 minutos.

MATERIAL: Cristalizador, parrilla, termómetro.

Filtración.

   1.       Coloque una coladera encima de un vaso de precipitados de 600 ml.

   2.       Acomode dos gasas dentro de la coladera.

   3.       Filtre el contenido de la solución de extracción.

   4.       Repita la operación, utilizando ahora una hoja de papel filtro para café.

MATERIAL: Coladera, vaso de precipitados de 600 ml, gasas, papel filtro para café.

Proteólisis.

   1.       Agregue media cucharadita de ablandador de carnes al filtrado.

   2.       Deje actuar el ablandador por espacio de 3 minutos.

   3.       Vuelva a filtrar repitiendo los pasos del procedimiento de “Filtración”.

MATERIAL: Coladera, vaso de precipitados de 600 ml, gasas, papel filtro para café, ablandador de carnes.

Precipitación del ADN.

   1.       En un tubo de ensayo coloque 10 ml de la solución filtrada.

   2.       Agregue la misma cantidad de alcohol etílico frío, dejando que resbale por las paredes del tubo, sin dejar que se mezcle con la solución filtrada.

   3.       Deje reposar en la gradilla por espacio de 5 minutos. En la interfase del líquido se formará una sustancia lechosa que contiene el ADN de la cebolla.

MATERIAL: 1 Gradilla, dos tubos de ensayo, alcohol etílico frío, una probeta de 50 ml.

Observación al microscopio.

   1.       Con ayuda del agitador o de un asa bacteriológica obtenga un poco de muestra del sobrenadante del tubo y colóquelo en un portaobjetos.

   2.       Tiña la muestra con azul de metileno o con hematoxilina de Harris.

   3.       Deje actuar el colorante por dos minutos, retire el exceso.

   4.       Coloque un portaobjetos y observe bajo el microscopio.

MATERIAL: Agitador de vidrio o asa bacteriológica, portaobjetos, cubreobjetos, azul de metileno o hematoxilina de Harris, microscopio compuesto.